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类风湿因子检测的原理

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类风湿因子(RF)是与个体自身免疫球蛋白反应的自身抗体。这些抗体通常针对人IgG的Fc片段。类风湿因子与三种主要的免疫球蛋白类别相关,包括:IgM,IgG和IgA。其中IgM和IgG是最常见的。关节间隙中免疫复合物的形成导致补体和破坏性炎症的激活,引起类风湿关节炎。

类风湿因子检测的原理

射频测试原理

有许多方法可用于测试类风湿因子。最常用的血清学方法是基于乳胶凝集试验。由于类风湿因子是针对IgG分子的Fc部分的IgM类抗体,因此通过其凝集涂有IgG分子的胶乳颗粒的能力来检测。

使用的试剂是聚苯乙烯胶乳颗粒在甘氨酸盐水缓冲液中的悬浮液,pH为8.6±0.1,涂有人γ球蛋白。

定性方法

程序

  1. 将所有试剂和样品置于室温下。
  2. 将一滴阳性对照和40ul患者血清置于载玻片上的不同圆圈中。
  3. 轻轻地在待测试和控制的每个样品圆上添加一滴类风湿因子乳胶试剂。
  4. 使用单独的涂抹棒/搅拌棒将反应混合物涂抹在特定区域的整个区域上。
  5. 在旋转振动器中前后倾斜滑块2分钟,使混合物缓慢旋转。
  6. 在明亮的人造光下观察2分钟后的凝集。

解释

胶乳颗粒的凝集被认为是阳性反应,表明类风湿因子的存在处于显着且可检测的水平。

阳性结果:乳胶颗粒悬浮液的凝集将在两分钟内发生,表明类风湿因子水平超过18IU/ml。

阴性结果:在两分钟内没有胶乳颗粒悬浮液的凝集。

半定量方法

1.使用等渗盐水以定性方法1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128制备连续稀释的测试样品,如下所示:

  1. 对于每个待测样品,将100μL0.9%盐水加入编号为1至5的试管中。
  2. 将100μL样品加入试管1中。
  3. 混合混合物。避免形成气泡。
  4. 将100μL混合样品从管1转移至2。
  5. 在管3至4中重复该连续稀释程序,然后5.在混合后从试管5中处理100μL

管1至5现在代表稀释系列如下:

类风湿因子检测的原理

2.使用每种稀释液作为测试样品进行定性测试程序。

射频测试的局限性

  • 在诊断为类风湿关节炎的所有患者中均未检测到类风湿因子。
  • 在患有传染性单核细胞增多症,结节病,系统性红斑狼疮,结核病或麻风病以及其他急性或慢性免疫应答的病症的患者中可以检测到增加的类风湿因子。
  • 应谨慎解释积极结果的重要性。应进行定量测试以确认类风湿关节炎的诊断。
  • 高度溶血和脂血清以及血浆干扰测试。

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